- 庄毅;
概述了我国古今中药内的生物制药工程中唯一的固体发酵生产真菌药物的情况,以神曲、猴头菌及槐耳菌质等为代表说明由"制曲工艺"、"固体培养"到固体发酵的理念与工艺的变化与发展,从"普通型固体发酵"发展到"双向型固体发酵"的范例可推断分析古代制曲工艺在基质中应用中药材的作用,说明其貌似粗糙而可能有潜在深刻的内涵亟待整理发掘。现已存在建立固体发酵系列工程的可能性,更显示了中药宝库的丰富内容和菌物药的价值,对指导研发新真菌药物有一定理论与实际意义。
2013年02期 v.11 63-71+88页 [查看摘要][在线阅读][下载 104K] [下载次数：2335 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：34 ] |[阅读次数：0 ] - 樊晓飞;杨明;姜磊;包海鹰;
应用梯度提取、反复重结晶及硅胶色谱法分离和纯化,采用NMR等谱学方法鉴定结构对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)菌丝体进行了化学成分的分析。从蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中分离得到6个化合物,分别鉴定为4,6,8(14),22(23)-四烯-3-酮-麦角甾烷(1)、麦角甾醇(2)、β-谷甾醇(3)、麦角甾醇过氧化物(4)、啤酒甾醇(5)、甘露醇(6)和1-油酰基-2-亚油酸-3-棕榈酸甘油(7),并对其石油醚提取物中的油状组分进行GC-MS分析,结果表明其中主要为亚油酸(9,12-十八碳二烯酸,含量41.949%)、反油酸(反9-十八碳烯酸,含量为27.696%);同时采用高效液相色谱法测定其中的麦角甾醇的含量,与海鲜菇、杏鲍菇、香菇、金针菇、滑子蘑、平菇等食用菌子实体比较,结果蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中麦角甾醇含量为15.65 mg/g,平菇为21.43 mg/g,杏鲍菇为10.16 mg/g,香菇为13.34 mg/g,金针菇为9.48 mg/g,滑子蘑为10.43 mg/g,海鲜菇为14.42 mg/g。
2013年02期 v.11 72-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 67K] [下载次数：753 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：32 ] |[阅读次数：0 ] - 高虹;程薇;周明;郭鹏;杨德;薛淑静;李露;史德芳;
采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)建立了测定菇柄麦角甾醇的含量测定方法。确定提取过程中皂化剂的种类和醇碱比后,将样品皂化,萃取后蒸干溶剂,乙醇定容测定。采用Phe-nomenex-C18色谱柱,V(流动相甲醇)∶V(水)=98∶2,流速1.0 mL/min,检测波长282 nm。结果表明:麦角甾醇线性回归方程为Y=9E+9×106X-8919.9(X:质量浓度,mg/mL),R2=0.998 9,0.01~0.30 mg/mL范围内线性关系良好,回收率为97.31%~101.95%。与紫外分光光度法所测结果比较,HPLC法测定菇柄中麦角甾醇含量灵敏、快速、准确,适用菇柄中麦角甾醇的含量测定。
2013年02期 v.11 78-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K] [下载次数：560 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：0 ] - 吴宗翰;杨扬;杜金;胡静;宋慧;
通过体外和小鼠体内试验,验证荧光标记的小刺猴头菌多糖的稳定性和生物体内代谢途径。结果表明:标记后的小刺猴头菌多糖体外稳定性在24 h内良好,小鼠体内代谢途径主要通过消化系统代谢,并在8 h内基本代谢完毕,这一结果为荧光标记真菌多糖的药理活性提供了依据。
2013年02期 v.11 82-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 25K] [下载次数：466 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：0 ] - 杨扬;綦天华;胡静;杜金;吴宗翰;宋慧;
对小刺猴头过滤掉发酵液的发酵菌丝体,水提和碱提后获得的均一组分多糖HMP-w1.1和HMP-a1.1进行结构性质的研究。结果表明:HMP-w1.1是分子量为36.3 kD的α型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc);HMP-a1.1是分子量为42.8 kD的β型吡喃糖,单糖组成为甘露糖(Man),半乳糖醛酸(GalUA),葡萄糖(Glc),半乳糖(Gal),岩藻糖(Fuc)。综合高碘酸氧化和Smith降解的试验结果,推断HMP-w1.1的糖苷键构型可能为1→、1→4、1→4,6、1→6、1→2、1→2,6;HMP-a1.1的糖苷键构型可能为1→6、1→2、1→2,6。
2013年02期 v.11 85-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 杨颜铭;宋慧;张中北;王丽娜;吴波;邢亚丽;
通过加入虫草多糖、树舌多糖、灵芝多糖、榆耳多糖、银耳多糖、小刺猴头菌多糖、黑木耳多糖和云芝多糖8种真菌多糖,观察真菌多糖对PNA与血细胞表面受体结合的影响。试验结果表明:小刺猴头菌多糖具有较强的与PNA的结合能力,这可能是由于小刺猴头菌多糖的空间结构或其上的半乳糖的连接方式、空间位置更适合与PNA结合的缘故。
2013年02期 v.11 89-92页 [查看摘要][在线阅读][下载 34K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 唐燕霞;拉喜那木吉拉;包海鹰;
采用DPPH和ABTS法对硬枝树花石油醚(30~60)、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等4个溶剂依次提取得到的浸膏物,进行抗氧化活性测定试验。结果表明:甲醇提取物,乙酸乙酯和二氯甲烷提取物在0.4~1.0 mg/mL检测浓度范围内对.DPPH的清除效果和质量浓度呈现一定的量效关系。甲醇提取物在1 mg/mL时,清除率高达93.99%,二氯甲烷提取物在1 mg/mL时清除率为92.32%,均高于同质量浓度的BHT。乙酸乙酯和二氯甲烷提取物在0.4~1.0mg/mL检测浓度范围内对ABTS.+自由基清除率与质量浓度呈现一定的量效关系,在1 mg/mL时,二氯甲烷提取物对ABTS.+自由基清除率为65.6%,乙酸乙酯提取物对ABTS.+自由基清除率为48%。
2013年02期 v.11 93-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 36K] [下载次数：158 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 鲁铁;图力古尔;刘宇;程显好;杨树德;
基于ITS序列用MEGA分析方法构建多年卧孔菌属28个种的分子系统树,确定白蜡多年卧孔菌和刺槐多年卧孔菌(槐耳)亲缘关系较近。白蜡多年卧孔菌粗提物大多具有一定的清除.DPPH活性,并随着提取物浓度的增加清除率也增高。通过清除.DPPH活力和总还原力比较分析,菌丝体和发酵液较好,较利于工业化开发。对子实体、菌丝体醇提取物、发酵液进行了抗宫颈癌Hela细胞活性检测发现,子实体乙醇提取物、发酵液具有一定的抑制肿瘤细胞的作用。
2013年02期 v.11 96-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 80K] [下载次数：257 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 齐彦秋;马珊珊;包海鹰;
采用圆滤纸片法,以金黄色葡萄球菌O41ermc、S19NMA1、ATCC25923和大肠杆菌ERcat、EΠ￡R、ATCC25923为受试菌种,对榆耳石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水不同极性提取物进行抑菌活性研究。结果表明:榆耳不同极性提取物对不同的菌种均有不同程度的抑制作用。
2013年02期 v.11 103-108页 [查看摘要][在线阅读][下载 61K] [下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 刘艳芳;唐庆九;杨焱;张劲松;冯娜;周帅;
利用大孔树脂分离富集北冬虫夏草发酵液中的虫草素。通过筛选可知NKA-Ⅱ型大孔树脂对虫草素的吸附与解吸效果最好。发酵液经树脂吸附6 h后,再以4倍树脂体积的50%乙醇解吸3 h,所得样品虫草素含量达31.5%,经反复结晶后得到纯度>98%的虫草素。结果表明:虫草素可明显抑制TGF-β1引起的人胚肺成纤维细胞α-SMA蛋白表达量的增加,并表现出一定的浓度依赖性,提示虫草素可能具有抑制肺纤维化活性。
2013年02期 v.11 109-112+123页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ] - 胡静;杜金;杨扬;吴宗翰;邢亚丽;宋慧;
采用Sw1116细胞进行粘附试验,研究树舌液体深层发酵浸膏多糖(GAP)能否影响细菌对细胞的粘附。结果表明:GAP质量浓度为300μg/mL时,对大肠杆菌、沙门菌的细胞粘附抑制最为明显,粘附率分别降至(22.8±1.2)、(31.2±1.6)个细菌/细胞,对乳酸杆菌粘附有明显的促进作用,粘附率达(40.0±1.3)。说明树舌液体深层发酵浸膏多糖对大肠杆菌、沙门氏菌的细胞粘附具有抑制作用,对于乳酸杆菌的粘附有促进作用,提示该GAP具有调节肠道微生态的潜在应用价值。
2013年02期 v.11 113-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 774K] [下载次数：78 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 杜金;胡静;隋玉龙;杨杨;吴宗翰;宋慧;
通过建立S180荷瘤小鼠试验动物模型,研究小刺猴头菌发酵浸膏寡糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响。选择灌胃的方法将不同组别小刺猴头菌发酵浸膏寡糖喂服到荷瘤小鼠体内,观察肿瘤生长情况,对其进行免疫功能的测定。结果表明:小刺猴头菌发酵浸膏寡糖可增加荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺质量,提高荷瘤小鼠血清的IL-2和TNF-α含量,抑制肿瘤生长,提高机体免疫功能。
2013年02期 v.11 116-119页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 王丽娜;吴波;丁国栋;尚红梅;杨颜铭;张中北;姜云瑶;宋慧;
研究金针菇菇脚(FVF)作为饲料添加剂对肉鸡生产性能及免疫功能的影响。结果表明:日粮中添加FVF能极显著提高肉鸡日增重(P<0.01),极显著降低肉鸡料肉比(P<0.01),显著提高肉鸡生长后期的胸腺指数(P<0.05),极显著促进肉鸡外周血淋巴细胞的增殖(P<0.01)。
2013年02期 v.11 120-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K] [下载次数：250 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：0 ] - 左言美;程显好;朱萌;李维焕;
为了解蛹虫草菌丝体对锌的富集特性,研究锌富集对蛹虫草菌丝体内虫草素、腺苷含量的影响,通过在液体培养基中添加不同质量浓度的锌离子(0~35 g/L),探讨其对蛹虫草菌丝生物量、菌丝体内锌积累量,以及锌的富集对菌丝体内虫草素、腺苷含量产生的影响。结果表明:在0~35 g/L锌离子的梯度范围内,蛹虫草菌丝生物量与锌质量浓度呈显著负相关,锌质量浓度35 g/L为蛹虫草菌丝生长极限浓度。锌质量浓度40.0 g/L及以上菌丝生长受到完全抑制。菌丝体内锌的积累量随锌质量浓度的增加而显著升高,锌质量浓度为35.0 g/L时锌积累量可达到193.87 mg/g(干重)。蛹虫草菌丝体内腺苷的含量随锌质量浓度的增加而降低,在锌质量浓度为5 g/L时降幅显著,腺苷含量仅为对照组的17.24%,之后腺苷含量变化趋势趋于水平。腺苷含量的降低可能是因为锌的富集干扰了蛹虫草菌丝体内初生代谢的正常进行。虫草素的含量随锌质量浓度的增加而显著降低,可能是由于其直接前体腺苷含量的降低,或是Zn离子的加入,使得某些被刺激的酶和基因通过转录因子影响了虫草素的合成。
2013年02期 v.11 124-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K] [下载次数：304 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 黄威;孙雪;包海鹰;
为筛选出红缘拟层孔菌发酵的最佳条件,并用于升罐发酵,试验优选出5个基础培养基,再以发酵菌丝体的生物量为指标,确定红缘拟层孔菌发酵的最佳条件。进行升罐发酵,间隔取出少量发酵液进行显微观察并检测葡萄糖含量,描述出菌丝体的生长状态。结果表明:红缘拟层孔菌发酵的最佳条件为马铃薯200 g/L,葡萄糖20 g/L,磷酸二氢钾1 g/L,硫酸镁1.5 g/L,维生素B10.4 g/L。升罐发酵中,菌丝干质量在前60 h处于快速的增长状态,最大为6.890 1 g/L,而60 h之后菌丝的生长变缓慢,到84 h之后,菌丝自溶,菌丝的产量开始下降。菌丝的葡萄糖含量经血糖仪检测在60 h时最高,达到0.296 5 g/L,之后呈现下降趋势。红缘拟层孔菌升罐发酵的最佳发酵时间为56~64 h。
2013年02期 v.11 129-132+140页 [查看摘要][在线阅读][下载 580K] [下载次数：167 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：0 ] - 牛姝力;李胜楠;隋玉龙;宋慧;
为研究常见元素对榆木离褶伞菌丝生长的影响,通过其在含有不同离子浓度的PDA培养基中生长速度的观察,探讨不同元素及其浓度对榆木离褶伞菌丝生长的影响。结果表明:1 mg/mL的Mg(Ac)2、KH2PO4和CaO促进菌丝生长;5,10 mg/mL的Mg(Ac)2、CaO,10mg/mL的Na2SO4、NaCl抑制菌丝生长;其他种类及浓度的离子对菌丝生长的影响不显著。
2013年02期 v.11 133-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 31K] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 隋玉龙;宋慧;杜金;牛姝力;李长田;
采用酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法,对灵芝属(GanodermaKarst.)9株灵芝进行品系间鉴定,并采用非加权组平均法(UPGMA)进行聚类分析。试验结果表明:在9个菌株(16 d)中共检测到40条酶带,各个菌株分别具有3至6条酶带,9个菌株共有4种酶谱类型。在相异系数为0.62时所有供试菌株归为1个群,在相异系数为0.81时,把9个菌株分为5个群。酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定方法可有效应用于灵芝属真菌品种鉴定及亲缘关系分析。
2013年02期 v.11 136-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 265K] [下载次数：301 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：0 ]
- 任昂;李梦娇;师亮;穆大帅;姜爱良;韩琴;赵明文;
灵芝三萜类化合物是灵芝的主要药用成分之一,灵芝三萜含量的多少是衡量灵芝质量高低的重要指标。经研究发现茉莉酸甲酯能显著提高灵芝三萜含量并上调灵芝三萜生物合成途径中的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、法尼酯焦磷酸合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达。通过在灵芝中建立的cDNA-AFLP体系,采用64对引物组合对灵芝的转录组进行分析。64对引物组合共产生3 910个TDFs。茉莉酸甲酯不同诱导条件下约有919个TDFs的表达谱发生了变化,占表达谱的23.5%,其中上调表达的有703个,下调表达的有216个。选择458个TDFs进行回收、TA克隆、测序后,获得390个高质量的TDFs片段。通过蛋白数据库同源性检索,并对蛋白功能进行GO分类,结果表明:390个高质量的TDFs中,BlastX比对后没有显著匹配的序列占77.1%。在有匹配蛋白的序列中,与碳代谢及能量相关的基因为最大一组,占35.2%,转录调控类及信号传导类基因分别占14.3%和11.0%。通过荧光定量PCR技术考察了茉莉酸甲酯对20个基因转录水平的影响,与cDNA-AFLP分析的结果相一致。并通过灵芝基因过量表达技术和基因沉默技术对筛选到的相关基因进行沉默和过量表达,研究筛选到的基因在灵芝三萜生物合成与调控中的作用,获得大量参与灵芝三萜生物合成与调控的候选基因,进一步阐明了茉莉酸甲酯诱导下灵芝基因表达的变化图。
2013年02期 v.11 141页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：770 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：0 ] - 任昂;欧阳翔;师亮;姜爱良;穆大帅;李梦娇;韩琴;赵明文;
灵芝三萜类化合物是灵芝的重要药用成分,具有多种重要的生理功能,灵芝中三萜含量的高低已成为衡量灵芝质量高低的重要指标。灵芝羟甲基戊二酰辅酶A合酶基因(A hy-droxymethylglutary-l CoA synthase,GlHMGS)作为甲羟戊酸途径中的第一个催化酶,催化乙酰CoA与乙酰乙酰CoA生成羟甲基戊二酰CoA,对于灵芝三萜的合成起着十分重要的作用。分别以灵芝总基因组DNA和反转录的原基cDNA为模板,扩增得到GlHMGS基因的全长DNA和cD-NA序列,该基因DNA全长1 870 bp,其中ORF为1 413 bp,编码471个氨基酸,推测的分子量为51.14kD。通过比对获得的DNA和cDNA序列,发现GlHMGS由5个外显子和4个内含子构成。与NCBI数据库中HMGS的蛋白序列比对发现,GlHMGS与解脂耶罗威亚酵母的HMGS表现出最高的同源性(51%)。进化树分析也表明GlHMGS与真菌亲缘关系最近,这与灵芝的物种分类相吻合。通过酿酒酵母HMGS缺陷的菌株证实所得GlHMGS能够使HMGS缺陷的表型得到互补,证实GlHMGS的功能。利用SEFA-PCR技术扩增GlHMGS基因上游启动子序列,该序列长约1 561 bp,用Softberry等软件对启动子序列进行分析,发现GlHMGS基因启动子中包含有明显的TATA-box和CAAT-box,并发现了多个与甾醇、激素和环境压力等调节相关的顺式作用元件。进一步研究发现,茉莉酸甲酯、脱落酸和水杨酸能够提高GlHMGS基因的转录水平。在研究不同发育阶段和不同碳源对GlHMGS基因的影响时,发现GlHMGS基因的表达水平分别在第16天和以麦芽糖为碳源时达到最大。通过过量表达GlHMGS基因能够显著提高灵芝三萜含量。
2013年02期 v.11 142页 [查看摘要][在线阅读][下载 5K] [下载次数：397 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：0 ] - 李慧仙;朱平;
对7-木糖紫杉烷糖基水解酶Lxy-l p1-2基因进行定向进化的初步研究,确定易错PCR条件、优化克隆连接方法、建立基于48微孔板高通量筛选模型。利用易错PCR技术对Lxy-l p1-2基因进行随机突变,比较不同浓度Mg2+进行易错PCR,每组随机挑取10个克隆进行测序。序列分析表明:在Mg2+浓度为7 mmol/L条件下,碱基平均突变率为0.12%,即对于Lxy-l p1-2基因(2.4 kb)来说,每个基因序列平均有3个碱基突变,达到构建突变文库的频率要求,选择该条件作为易错PCR条件。利用in-fusion技术将Lxy-l p1-2突变基因克隆到pPIC3.5K载体中,获得大量重组突变质粒。该研究优化了in-fusion连接反应中基因片段和载体片段的摩尔比,并探讨了基因片段与载体片段间同源序列长度对in-fusion连接效率的影响。试验结果表明:基因片段与载体片段的摩尔比最佳梯度为5∶1;同源序列长度的选择成为影响in-fusion连接效率的关键因素之一。当同源序列长度为100 bp时连接效率达到最大值,且显著高于同源序列长度为15~50 bp的连接效率,此时阳性重组率提高至90%左右。与常规酶切-连接法相比,in-fusion法具有明显优势,同时将克隆周期由3~4d缩短为1~2d。挑取单菌落,在48微孔培养板上进行培养、诱导表达2 d后,取菌液进行酶活测定(底物PNP-Xyl)。以野生型为例,β-木糖苷酶的酶活OD405均数μ=3.415,其数据组标准差为σ=±0.078,数值符合正态分布的原理,建立统计学野生型均数分布范围和48微孔板高通量筛选,为后续突变体筛选提供基础。
2013年02期 v.11 143页 [查看摘要][在线阅读][下载 5K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 高丽丽;杨金玲;朱平;
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径生成的中间体2,3-氧化鲨烯是三萜类化合物的合成前体,以酿酒酵母为底盘细胞通过合成生物学技术组建这些化合物的代谢途径时,需要下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢流。在酿酒酵母中由羊毛甾醇合酶(ERG7)催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点。采用基因敲除和反义RNA 2种技术对ERG7基因的表达进行下调。设计含有与ERG7基因ORF两侧序列同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR扩增,构建带有loxP-Marker-loxP的ERG7基因敲除组件,采用LiAc/SS Carrier DNA/PEG方法转化双倍体酿酒酵母INVSc1,通过同源重组的方式获得酿酒酵母ERG7基因单倍体缺失突变株,并对其进行了分子生物学确证。大量培养野生型和突变型菌株,菌体冷干后在碱醇溶液中90℃回流1h,正己烷萃取后旋蒸干溶剂,甲醇溶解残留物麦角甾醇。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与野生型菌株相比,突变型菌株的麦角甾醇含量明显降低。
2013年02期 v.11 144页 [查看摘要][在线阅读][下载 5K] [下载次数：452 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 穆大帅;师亮;任昂;李梦娇;吴凤礼;姜爱良;赵明文;
灵芝是一种重要的药用真菌,然而由于近几年缺乏有效的反向遗传体系研究,灵芝的分子遗传相关研究进展相对缓慢。该研究建立了一种更加简便快捷的灵芝电穿孔转基因方法,利用灵芝内源乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶基因(ura3)作为反向筛选标记,构建4种沉默载体(颈环结构沉默载体,正向沉默载体,反向沉默载体以及正反双向启动子沉默载体),并基于此转基因方法实现了对灵芝内源基因的沉默。通过系统比对以上4种沉默方法,发现4种沉默方法都不同程度地下调了ura3基因的表达,其中双向启动子沉默不仅载体构建方便并且能够获得最高的沉默效率(达到81.9%)。利用这种双向启动子沉默载体以及ura3的反向筛选特性,建立了灵芝的共沉默体系,发现共沉默下基因转录的下调有一定的相关性,提高了基因沉默的筛选效率。该反向遗传体系的建立有助于深入研究灵芝中单基因或多基因的功能,推动灵芝等大型担子菌的分子遗传研究进展。
2013年02期 v.11 145页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：499 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：0 ] - 杨涛;董彩虹;
蛹虫草[Cordyceps militaris(L.)Link],隶属于肉座菌目(Hypocreales),麦角菌科(Clavicipitaceae),虫草属(Cordyceps),其滋补作用和药用功效与名贵但难以人工培养的冬虫夏草相近,并日渐成为冬虫夏草的理想替代品。蛹虫草为虫草属模式种,分布广泛,在人工培养基或昆虫蛹体上能产生无性和有性阶段,其基因组已公布,成为大型真菌生物学研究的理想模型。对真菌而言,光可影响其生长发育、生理周期、形态变化及次级代谢产物产生,光照是蛹虫草子实体生长发育的必要条件,并能够调控其类胡萝卜素的产生。该研究采用5株代表性的蛹虫草菌株,包括1株退化菌株、1株白化菌株和3株在栽培中广泛运用但子实体形态各异的菌株作为对象,研究其光形态建成、克隆蓝光受体基因Cmwc-1并测定在不同光照条件下其表达量的变化。结果表明,除白化菌株外,光照刺激促进菌丝色素的形成,且蓝光的作用优于白光。光照抑制生长速度,所有的菌株在黑暗条件下生长最快,白光次之,蓝光最慢,退化菌株的生长速度在3种培养条件下均优于其他菌株。此外,光照促进分生孢子的产生。退化菌株在白光和蓝光条件下产孢量均最大。为了从分子层面阐明蛹虫草对光刺激的应答反应,该研究通过Hai-l tail PCR和基因步移的方法克隆得到了蓝光受体基因Cmwc-1。CmWC-1是1个GA-TA-Zinc finger型转录因子,含有谷氨酸富集结构域,LOV(Light,Oxygen,or Voltage),PAS(Per-Arn-t Sim)和锌指结构域,与粗糙脉孢霉的蓝光受体结构域组成基本一致。对5个研究对象的CmWC-1序列比较分析发现3个菌株在谷氨酰胺富集结构域缺失5个谷氨酰胺。基于JTT模型的贝叶斯树和最大似然法构建的WC-1系统树,其树形和ITS序列构建的系统树基本一致,且粪壳菌纲的一些主要类群以较高的支持率被划分为单系,说明WC-1可以作为系统进化分析的一个参照。Cmwc-1在黑暗条件下表达,光照刺激后表达量增加,待光照时间持续30 min,其表达量将不再上升,即光适应现象。蛹虫草光受体基因的研究将为子实体发育研究奠定基础。
2013年02期 v.11 146页 [查看摘要][在线阅读][下载 6K] [下载次数：609 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 杨焱;李巧珍;吴迪;周帅;唐传红;刘艳芳;
猴头菌(Hericium erinaceus)多糖是猴头菌发挥药理作用的主要活性成分,猴头菌生长过程中多糖的合成代谢及其结构的变化目前还鲜有研究报道。该试验研究了猴头菌生长发育过程中多糖的产生及其结构和活性的变化。对猴头菌0605菌株生长发育6个时期的子实体进行了多糖和β-葡聚糖含量的测定,并对提取的粗多糖进行了体外免疫活性的研究。结果表明:在猴头菌的整个生长发育过程中,子实体多糖的含量呈现上升的趋势,成熟期含量最高,达1.54%,分裂期含量最低仅0.89%;β-葡聚糖含量整体上呈上升的趋势,中菌刺期含量最高33.58%,成熟期最高,达到50.67%;体外免疫活性试验表明,现蕾期、分裂期、中菌刺期和成熟期的多糖均能很好地刺激巨噬细胞RAW264.7产生NO,活性均优于无菌刺期和小菌刺期的多糖。分别采用体积分数为30%、50%和70%的乙醇对子实体发育后3个时期的热水浸提物进行分级醇沉,对分级分离多糖进行理化性质研究。结果表明:小菌刺期30%醇沉的粗多糖得率高于中菌刺期和成熟期,其大分子量多糖的比例也较高;3个时期50%和70%醇沉多糖分子量相差不大;分级分离多糖的单糖种类基本相同,都含有岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,但摩尔比有差异;3个时期分级分离多糖均能刺激巨噬细胞分泌NO,30%醇沉多糖比50%和70%醇沉多糖的活性好;成熟期多糖的活性优于其他生长阶段。对小菌刺期、中菌刺期和成熟期50%醇沉多糖(H5FP4B、H5FP5B、H5FP6B)进行Sephacryl S300凝胶层析纯化,共得到9个组分:H5FP4B-1、H5FP5B-1、H5FP6B-1、H5FP4B-2、H5FP5B-2、H5FP6B-2、H5FP4B-3、H5FP5B-3、H5FP6B-3。对这9个组分的分子量分布进行研究,发现每个时期的主峰(H5FP4B-3、H5FP5B-3和H5FP6B-3)分子量基本相同,分子量分布差异较大的是3个时期的第1组分,在体外免疫活性上也表现出较大差异。主峰H5FP4B-3的分子量为1.59万,由岩藻糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.2∶23.9∶1。经红外光谱、甲基化和核磁共振综合分析,解析出H5FP4B-3均一多糖的结构单元是以α-D-1,6连接的半乳糖和α-D-1,2,6连接的半乳糖构成主链,侧链为α构型的端基岩藻糖。研究结果表明:猴头菌不同发育阶段产生的多糖结构和活性有一定的差异,生长初期,大分子量的多糖较多,后期分子量分布差异变小并趋稳定。多糖主成分变化不大,较稳定;到成熟期,多糖的活性更高。
2013年02期 v.11 147页 [查看摘要][在线阅读][下载 6K] [下载次数：270 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 甄心;巩婷;朱平;
对分离自南海丰肉结海绵的相关链霉菌LS-298菌株的活性代谢产物进行研究,以抗菌活性和化学筛选相结合为指导,采用硅胶柱、凝胶柱以及制备HPLC等色谱方法对LS-298发酵产物进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等波谱分析手段对分离得到的化合物进行结构鉴定,以滤纸片扩散法及MTT法分别检测其抗菌和抗肿瘤活性。共分离鉴定了17个化合物,其中1个新化合物,环(脯氨酸-4-羟基-缬氨酸)(1),16个已知化合物分别为尿嘧啶核苷(2),2′-脱氧尿嘧啶核苷(3),邻苯二甲酸正丁二酯(4),邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(5),3-甲酰胺-吲哚(6),环(脯氨酸-赖氨酸)(7),环(脯氨酸-苯丙氨酸)(8),环(脯氨酸-酪氨酸)(9),环(脯氨酸-亮氨酸)(10),meleagrin(11),5-hydroxyectione(12),棘霉素(echinomycin)(13),光黄素(14),N-[2-(1H-indo-l 3-yl)-2-oxo-ethyl]-acetamide(15),3-甲酰胺吡啶(16),替达霉素B(tirandamycin B)(17)。其中,棘霉素和替达霉素B为首次从同一株放线菌中分离得到,且后者目前仅在海洋放线菌中被发现,两者不仅具有较强的抗菌活性,亦具有很强的体外抗肿瘤活性。
2013年02期 v.11 148页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 钱一鑫;康冀川;雷帮星;
重视药用植物内生真菌的研究,实现利用内生真菌代替药用植物生产活性物质,具有重要的生态学和经济学意义。白苞蒿(Artemisia lactifloraWall.ex DC.)是一种重要的药用植物,已收载于《中国药典》2010年版一部附录,是中药刘寄奴的基原植物之一,具有清热、解毒、止咳、消炎、活血、散瘀、通经等功效,用于肝、肾疾病的治疗。该研究以白苞蒿的根、茎、叶和花为试验材料进行内生真菌的分离,共分离得到白苞蒿内生真菌54株;以人骨髓白血病细胞系(HL-60)、人乳腺癌细胞系(MCF-7)和人前列腺癌细胞系(PC-3)为细胞模型,采用MTT法对54株白苞蒿内生真菌发酵物粗提物的体外抗肿瘤活性进行筛选,发现对3种肿瘤细胞增殖的抑制率在90%以上的菌株共有5株,占总菌株数的9.3%;以白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌3种病原细菌为靶标菌,采用滤纸片法对54株白苞蒿内生真菌发酵物粗提物的抗菌活性进行筛选。结果表明:所有菌株对白色念珠菌均未表现明显的抑菌活性,而对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌有一定抑菌活性的菌株共有17株,占总菌株数的31.5%,其中有2株对金黄色葡萄球菌表现较强的抑菌活性。
2013年02期 v.11 149页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：293 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 冯娜;吴娜;杨焱;汪雯翰;唐庆九;邵倩;张劲松;
鲍姆木层孔菌(Phellinus baumii)俗称桑黄菇,桑耳,是近年来开发的一种多年生药用真菌。已经有研究证实,桑黄具有降血糖,抗氧化,抗肿瘤等生物活性。该研究从化学成分的分离纯化和结构鉴定入手,寻找鲍姆木层孔菌子实体中具有抗肿瘤活性的化合物,为桑黄保健品的开发提供研究基础。采用色谱柱层析法,从鲍姆木层孔菌子实体中分离得到6个化合物,通过波谱分析,分别鉴定为Ergosta-7,22-diene-3β-ylpentadecanoate,Stellasterol,Ganoderol B,Ergos-t6,22-diene-3β,5α,8α-triol,Ganoderic acid DM,Inoscavin A。体外试验结果表明:化合物GanoderolB和Inoscavin A对肿瘤细胞HepG2的增殖均有抑制作用。其中,化合物Inoscavin A的抑制作用较强,其抑制肿瘤细胞增殖的IC50值为72.3μg/mL(156.4μmol/L)。
2013年02期 v.11 150页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 陈天娇;朱平;
糖基水解酶Lxy-l p1-1和Lxy-l p1-2是天然药物活性物质与功能国家重点实验室,卫生部天然药物生物合成重点实验室克隆自真菌香菇的重组蛋白,具有β-木糖苷酶/β-葡萄糖苷酶双重活性,能专一性水解脱除7-木糖-10-去乙酰紫杉醇等的木糖基,生成的C-7位羟基化产物可以作为前体半合成重要的抗肿瘤药物紫杉醇或其类似物。前期工作显示:Lxy-l p1-1和Lxy-lp1-2的序列同源性高达97%,但后者的催化活性是前者的2倍以上;Lxy-l p1-2水解生色底物PNP-Xyl的最适温度为50℃,最适pH为4.0。为系统地观察两酶的催化特性,在对天然药物活性物质与功能国家重点实验室,卫生部天然药物生物合成重点实验室构建的工程酵母进行培养、诱导7 d后冷冻干燥菌体。将冷干的菌体破碎得到蛋白粗提物,再经过Ni亲和色谱和HPLC凝胶色谱法制备和纯化得到Lxy-l p1-1和Lxy-l p1-2重组蛋白。以生色底物PNP-Xyl和PNP-Glc及7-木糖紫杉烷底物7-木糖-10-去乙酰紫杉醇(XDT)与重组酶进行反应,重点测定Lxy-l p1-2水解XDT的最适温度和最适pH,并在最适条件下测定重组酶对不同底物的动力学参数。试验结果表明:Lxy-l p1-2水解底物XDT的最适温度为45℃,最适pH为4.5;动力学测定结果显示:Lxy-l p1-1和Lxy-l p1-2的β-葡萄糖苷酶活性均显著高于其β-木糖苷酶活性,这与之前的研究结果相一致;Lxy-l p1-1对于底物PNP-Xyl,PNP-Glc和XDT的kcat/Km值分别低于Lxy-lp1-2对于上述3种底物的kcat/Km值(0.77 s-1×mM-1,1.65 s-1×mM-1和0.30 s-1×mM-1vs.1.67 s-1×mM-1,2.85 s-1×mM-1和1.07 s-1×mM-1)。
2013年02期 v.11 151页 [查看摘要][在线阅读][下载 6K] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 杜秀菊;张劲松;杨焱;唐庆久;贾薇;刘艳芳;周帅;
金耳(Tremella aurantialbaBandoni et Zang)是我国稀有的珍贵食用菌和药用菌,具有化痰、止咳、定喘、调气、平肝阳之功效。多糖作为金耳的主要生理活性成分之一,具有增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗血栓和抗氧化等作用。但由于技术手段的落后,金耳多糖的化学研究比较滞后,其药理活性的研究也主要集中于粗多糖的研究,对均一多糖的化学结构分析和生物活性还很少涉及,这种状况对合理开发和利用金耳多糖产品造成很大影响。该研究对金耳子实体多糖进行了提取、分离纯化、结构鉴定、分子修饰和生物活性研究,为更好地开发金耳资源提供可靠的理论依据。
2013年02期 v.11 152页 [查看摘要][在线阅读][下载 9K] [下载次数：727 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 拉喜那木吉拉;包海鹰;
药用地衣长松萝(Usnea longissimaAch.)是藏、蒙、维、傣等多个民族以各自的传统医药理论为依据,应用于医疗实践中的传统药材之一,其次生代谢产物有二苯骈呋喃类、缩酚酸类、单环苯酚类、甾醇类、三萜类、脂肪酸类及多糖等,具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗血栓活性、抗血小板、免疫调节、抗辐射生物活性等。该研究采用ABTS和DPPH 2种方法对长松萝干燥枝状地衣体中提取分离纯化得到的2个新化合物(4aR,9bS)-2,6-二乙酰基-3,4a,7,9-四羟基-8,9b-二甲基-1-氧代-1,4,4a,9b-四氢二苯骈呋喃酮(1)、4-[3-(7-乙酰基-4,6-二羟基-3,5-二甲基-2-氧代-2,3-二氢苯骈呋喃基)]-4-[2-(7-乙酰基-4,6-二羟基-3,5-二甲基苯骈呋喃基)]-3-氧代丁酸乙酯(2)进行抗氧化活性测定。结果2个化合物均表现不同程度的抗氧化能力,并显示浓度依赖性。2种方法测定结果:化合物(1)的ABTS法测试总抗氧化能力为3.53 mmol/LTrolox;DPPH自由基半数清除浓度(IC50)为0.31 mmol/L,化合物(2)的ABTS法测试总抗氧化能力为12.39 mmol/LTrolox;DPPH自由基半数清除浓度(IC50)为0.01 mmol/L,标准品2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)半数清除浓度(IC50)为0.16 mmol/L。
2013年02期 v.11 153页 [查看摘要][在线阅读][下载 4K] [下载次数：213 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：0 ] - 雷帮星;康冀川;曾祥羽;李世楠;何劲;文庭池;钱一鑫;
N6-(2-羟乙基)腺苷[N6-(2-hydroxyethyl)-Adenosine,HEA],又名茧草菌素,是一种钙离子拮抗剂,具有抗紫外辐射、抗血小板凝结和镇痛等效用,是集医药保健、化妆品等多项开发潜力于一身的生物资源,也是衡量虫草制品质量的一个重要生物活性物质指标。该研究采用高效液相色谱法对菌丝体中HEA进行检测,以HEA的产量为指标,考察不同培养方法、培养基及其组分、前体物和氨基酸对粉被虫草(Cordyceps pruinosaPetch)cp菌株产HEA的影响。结果表明:在沙氏培养基上,静置培养120 d,cp菌株HEA的产量明显优于摇床培养20 d和发酵罐培养3 d的产量,说明随培养时间的延长,cp菌株中HEA的累积会逐步增加。在静置培养条件下,cp菌株在查氏培养基上HEA的产量明显优于沙氏培养基和PD培养基,HEA的产量是沙氏培养基的3.7倍,是PD培养基的4.48倍。以查氏培养基为基础培养基,静置培养120 d进行碳、氮源的筛选中,最有利于cp菌株产HEA的是蔗糖和硝酸钠;在无机盐的筛选中,K2HPO4是促进cp菌株累积HEA最主要的无机盐,其HEA产量较对照(不添加无机盐的查氏培养基)提高了58.2倍;在查氏培养基上添加不同前体物和氨基酸,发现其结构类似物腺苷、次黄嘌呤和腺嘌呤都有促进cp菌株累积HEA的能力,其中腺苷和次黄嘌呤的效果最好,能提高HEA产量60%以上;添加的14种氨基酸中有组氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、天门冬酰胺、丝氨酸、亮氨酸、L-丙氨酸、赖氨酸和精氨酸等9种氨基酸能促进cp菌株产HEA的能力,其中组氨酸是最有利于cp菌株累积HEA的氨基酸,其HEA产量较ck(查氏培养基)提高251.68%,HEA产量达到(45.56±2.8)mg/L,菌丝体中HEA含量达到(4 633.10±65.65)μg/g。
2013年02期 v.11 154页 [查看摘要][在线阅读][下载 6K] [下载次数：206 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]